নতুন করোনাভাইরাস (SARS-Cov-2) নিউক্লিক অ্যাসিড সনাক্তকরণ কিট
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluআকরিকscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】নতুন করোনাভাইরাস (SARS-Cov-2) নিউক্লিক অ্যাসিড সনাক্তকরণ কিট (ফ্লুরোসেন্ট RT-PCR প্রোব পদ্ধতি)
【Packaging specifications 】25 টেস্ট/কিট
【Intended usবয়স】
এই কিটটি নতুন করোনভাইরাস থেকে নিউক্লিক অ্যাসিডের গুণগত সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহার করা হয় নাসোফ্যারিঞ্জিয়াল সোয়াব, অরোফ্যারিঞ্জিয়াল (গলা) সোয়াব, অগ্রবর্তী অনুনাসিক সোয়াব, মিড-টার্বিনেট সোয়াব, নাক ধোয়া এবং কোভিড-১৯ দ্বারা সন্দেহভাজন ব্যক্তিদের থেকে অনুনাসিক অ্যাসপিরেটস। নতুন করোনভাইরাসটির ORF1ab এবং N জিন সনাক্তকরণ নতুন করোনভাইরাস সংক্রমণের সহায়ক নির্ণয়ের এবং মহামারী সংক্রান্ত পর্যবেক্ষণের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।
【Principles of the procedure 】
এই কিটটি নির্দিষ্ট TaqMan প্রোব এবং নভেল করোনাভাইরাস (SARS-Cov-2) ORF1ab এবং N জিন সিকোয়েন্সের জন্য ডিজাইন করা নির্দিষ্ট প্রাইমারের জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। পিসিআর প্রতিক্রিয়া সমাধানে নির্দিষ্ট লক্ষ্য সনাক্তকরণের জন্য নির্দিষ্ট প্রাইমার এবং ফ্লুরোসেন্ট প্রোবের 3 সেট রয়েছে এবং অন্তঃসত্ত্বা হাউসকিপিং জিনগুলি সনাক্ত করার জন্য কিটের অভ্যন্তরীণ মান নিয়ন্ত্রণ হিসাবে নির্দিষ্ট প্রাইমার এবং ফ্লুরোসেন্ট প্রোবের একটি অতিরিক্ত সেট ব্যবহার করা হয়।
পরীক্ষার নীতি হল PCR বিক্রিয়ায় Taq এনজাইমের exonuclease কার্যকলাপ দ্বারা নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্ট প্রোব হজম এবং অবনমিত হয়, যাতে রিপোর্টার ফ্লুরোসেন্ট গ্রুপ এবং quenched ফ্লুরোসেন্ট গ্রুপকে আলাদা করা হয়, যাতে ফ্লুরোসেন্ট মনিটরিং সিস্টেম একটি ফ্লুরোসেন্ট গ্রহণ করতে পারে। সংকেত, এবং তারপর পিসিআর পরিবর্ধনের সমৃদ্ধকরণ প্রভাবের মাধ্যমে, প্রোবের ফ্লুরোসেন্স সিগন্যাল একটি সেট থ্রেশহোল্ড মান-সিটি মান (সাইকেল থ্রেশহোল্ড) পৌঁছে যায়। কোন লক্ষ্য amplicon ক্ষেত্রে, প্রোবের রিপোর্টার গ্রুপ quenching গ্রুপ কাছাকাছি হয়. এই সময়ে, ফ্লুরোসেন্স রেজোন্যান্স এনার্জি ট্রান্সফার হয়, এবং রিপোর্টার গ্রুপের ফ্লুরোসেন্স quenching গ্রুপ দ্বারা নিভিয়ে দেওয়া হয়, যাতে ফ্লুরোসেন্ট পিসিআর যন্ত্র দ্বারা ফ্লুরোসেন্ট সিগন্যাল সনাক্ত করা যায় না।
পরীক্ষার সময় রিএজেন্টগুলির ব্যবহার নিরীক্ষণ করার জন্য, কিটটি ইতিবাচক এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের সাথে সজ্জিত: ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণে টার্গেট সাইট রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড রয়েছে এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ পাতিত জল, যা পরিবেশ দূষণ নিরীক্ষণ করতে ব্যবহৃত হয়। পরীক্ষার সময় একই সাথে একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং একটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ সেট করার সুপারিশ করা হয়।
【Main comপোনেনts 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | কম্পোনents | |
ন্যামe | স্পেকification | কোয়ান্টity | কোয়ান্টity | |
ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ | 180 μL/শিশি | 1 | 1 | কৃত্রিমভাবে নির্মিত প্লাজমিড, পাতিত জল |
নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ | 180 μL/শিশি | 1 | 1 | পাতিত জল |
SARS-Cov-2 মিক্স | 358.5 μL/শিশি | 1 | / | নির্দিষ্ট প্রাইমার জোড়া, নির্দিষ্ট সনাক্তকরণ ফ্লুরোসেন্ট প্রোব, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, পাতিত জল, ইত্যাদি |
এনজাইম মিক্স | 16.5 μL/শিশি | 1 | / | তাক এনজাইম, রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ, ইউএনজি এনজাইম ইত্যাদি। |
SARS-Cov-2 মিক্স (লাইওফিলাইজড) | 25টি পরীক্ষা/শিশি | / | 1 | নির্দিষ্ট প্রাইমার জোড়া, নির্দিষ্ট সনাক্তকরণ ফ্লুরোসেন্ট প্রোব, dNTPs, Taq এনজাইম, বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ, পাতিত জল, ইত্যাদি। |
2x বাফার | 375 μL/শিশি | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, পাতিত জল, ইত্যাদি |
দ্রষ্টব্য:(1) বিভিন্ন ব্যাচ কিটের উপাদানগুলিকে মিশ্রিত বা বিনিময় করা যাবে না।
(2) আপনার নিজস্ব বিকারক প্রস্তুত করুন: নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন কিট।
【Storage conditions এবং expiration date 】
For BST-SARS-25:একটি দীর্ঘ সময়ের জন্য -20±5℃ এ পরিবহন এবং সঞ্চয় করুন।
For BST-SARS-DR-25:ঘরের তাপমাত্রায় পরিবহন। -20±5℃ এ দীর্ঘ সময়ের জন্য সংরক্ষণ করুন।
বারবার ফ্রিজ-থাও চক্র এড়িয়ে চলুন। বৈধতার সময়কাল 12 মাসের জন্য অস্থায়ীভাবে সেট করা হয়েছে।
উত্পাদন এবং ব্যবহারের তারিখের জন্য লেবেল দেখুন।
প্রথম খোলার পরে, বিকারককে -20±5 °C তাপমাত্রায় 1 মাসের বেশি না হওয়া পর্যন্ত বা রিএজেন্ট সময়কালের শেষ না হওয়া পর্যন্ত, যে তারিখটি আগে আসুক, বারবার ফ্রিজ-থাও চক্র এড়াতে এবং রিএজেন্ট ফ্রিজের সংখ্যা এড়াতে পারে। -গলানোর চক্র 6 বারের বেশি হওয়া উচিত নয়।
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480।
【Sample requirements 】
1. প্রযোজ্য নমুনার ধরন: নিষ্কাশিত নিউক্লিক অ্যাসিড সমাধান।
2. নমুনা সঞ্চয়স্থান এবং পরিবহন: 6 মাসের জন্য -20±5℃ এ সঞ্চয় করুন। নমুনাগুলিকে 6 বারের বেশি না জমা এবং গলানো।
【Tঅনুমানing method】
1.Nucleic acid extraction
ভাইরাল নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন করার জন্য একটি উপযুক্ত নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন কিট নির্বাচন করুন এবং সংশ্লিষ্ট কিটের নির্দেশাবলী অনুসরণ করুন। Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. বা সমতুল্য নিউক্লিক অ্যাসিড পরিশোধন কিট দ্বারা উত্পাদিত একটি নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন এবং পরিশোধন কিট ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
2. Reaction reagent prepআরাtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) SARS-Cov-2 মিক্স এবং এনজাইম মিক্সটি সরান, ঘরের তাপমাত্রায় সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত করুন ভর্টেক্স ডিভাইস দ্বারা ভালভাবে মিশ্রিত করুন এবং তারপরে সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন।
(2) 358.5uL SARS-Cov-2 মিক্সে 16.5uL এনজাইম মিক্স যোগ করা হয়েছিল এবং মিশ্র প্রতিক্রিয়া সমাধান পাওয়ার জন্য পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করা হয়েছিল।
(3) একটি পরিষ্কার 0.2 মিলি পিসিআর অক্টাল টিউব প্রস্তুত করুন এবং প্রতি কূপের উপরোক্ত মিশ্র প্রতিক্রিয়া দ্রবণের 15uL দিয়ে চিহ্নিত করুন।
(4) 15 μL বিশুদ্ধ নিউক্লিক অ্যাসিড দ্রবণ, ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ যোগ করুন এবং অক্টাল টিউব ক্যাপটি সাবধানে ঢেকে দিন।
(5) উল্টে দিয়ে ভালভাবে মেশান এবং টিউবের নীচে তরলকে ঘনীভূত করার জন্য দ্রুত সেন্ট্রিফিউজ করুন।
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) বিক্রিয়া মিশ্রণ প্রস্তুত করতে SARS-Cov-2 মিক্স((Lyophilised)-এ 375ul 2x বাফার যোগ করুন। পাইপেটিং দিয়ে ভালোভাবে মেশান এবং তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন। দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজ।)
(2) একটি পরিষ্কার 0.2 মিলি পিসিআর অক্টাল টিউব প্রস্তুত করুন এবং প্রতি কূপে 15μL প্রতিক্রিয়া মিশ্রণ দিয়ে চিহ্নিত করুন।
(3) 15μL পরিশোধিত নিউক্লিক অ্যাসিড দ্রবণ, ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ যোগ করুন এবং অক্টাল টিউব ক্যাপটি সাবধানে ঢেকে দিন।
(4) উল্টে দিয়ে ভালভাবে মেশান এবং টিউবের নীচে তরলকে ঘনীভূত করার জন্য দ্রুত সেন্ট্রিফিউজ করুন।
3. পিসিআর amplification (অপারেশন সেটিংসের জন্য অনুগ্রহ করে ইন্সট্রুমেন্ট ম্যানুয়াল পড়ুন।)
3. 1 ফ্লুরোসেন্ট পিসিআর যন্ত্রের নমুনা চেম্বারে PCR 8-টিউব রাখুন, এবং নমুনা পরীক্ষা করার জন্য সেট করুন, লোডিংয়ের ক্রম অনুসারে ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ।
3.2 ফ্লুরোসেন্স সনাক্তকরণ চ্যানেল:
(1) ORF1ab জিন FAM এর সনাক্তকরণ চ্যানেল নির্বাচন করে (প্রতিবেদক: FAM, Quencher: None)।
(2) N জিন VIC এর সনাক্তকরণ চ্যানেল নির্বাচন করে (প্রতিবেদক: VIC, Quencher: None)।
(3) অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড জিন CY5 এর সনাক্তকরণ চ্যানেল নির্বাচন করে (প্রতিবেদক: CY5, Quencher: None)।
(4) প্যাসিভ রেফারেন্স ROX এ সেট করা হয়েছে।
3.3 PCR প্রোগ্রাম প্যারামিটার সেটিং:
ধাপ | তাপমাত্রা (℃) | সময় | চক্রের সংখ্যা | |
1 | বিপরীত প্রতিলিপি প্রতিক্রিয়া | 50 | 15 মিনিট | 1 |
2 | Taq এনজাইম সক্রিয়করণ | 95 | 2.5 মিনিট | 1 |
3 | Taq এনজাইম সক্রিয়করণ | 93 | 10 সে | 43 |
অ্যানিলিং এক্সটেনশন এবং ফ্লুরোসেন্স অধিগ্রহণ | 55 | 30 সে |
সেট করার পরে, ফাইলটি সংরক্ষণ করুন এবং প্রতিক্রিয়া প্রোগ্রাম চালান..
4.Results analysis
প্রোগ্রাম শেষ হওয়ার পরে, ফলাফলগুলি স্বয়ংক্রিয়ভাবে সংরক্ষিত হয় এবং পরিবর্ধন বক্ররেখা বিশ্লেষণ করা হয়। পরিবর্ধন বক্ররেখা যন্ত্রের ডিফল্ট থ্রেশহোল্ডে সেট করা আছে।
【Explanation of test results 】
1. পরীক্ষার বৈধতা নির্ধারণ করুন: ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ FAM, VIC চ্যানেলের একটি সাধারণ পরিবর্ধন বক্ররেখা থাকা উচিত, এবং Ct মান সাধারণত 34-এর কম, কিন্তু বিভিন্ন যন্ত্রের বিভিন্ন প্রান্তিক সেটিংসের কারণে ওঠানামা হতে পারে। নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ FAM, VIC চ্যানেল অ-বর্ধিত Ct হওয়া উচিত। এটি সম্মত হয় যে উপরের প্রয়োজনীয়তাগুলি অবশ্যই একই সময়ে পূরণ করতে হবে, অন্যথায় এই পরীক্ষাটি অবৈধ।
2. ফলাফলের রায়
FAM/VIC চ্যানেল | রায়ের ফলাফল |
সিটি-37 | নমুনা পরীক্ষা ইতিবাচক |
37≤Ct<40 | পরিবর্ধন বক্ররেখা S-আকৃতির, এবং সন্দেহজনক নমুনাগুলি পুনরায় পরীক্ষা করা প্রয়োজন; পুনঃপরীক্ষার ফলাফল সামঞ্জস্যপূর্ণ হলে, এটি ইতিবাচক হিসাবে বিচার করা হয়, অন্যথায় এটি নেতিবাচক |
Ct≥40 বা কোন পরিবর্ধন নয় | নমুনা পরীক্ষা নেতিবাচক (বা কিট সনাক্তকরণের নিম্ন সীমার নিচে) |
দ্রষ্টব্য: (1) যদি FAM চ্যানেল এবং VIC চ্যানেল উভয়ই একই সময়ে ইতিবাচক হয়, তাহলে SARS-Cov-2 ইতিবাচক হতে নির্ধারিত হয়।
(2) যদি এফএএম চ্যানেল বা ভিআইসি চ্যানেলটি ইতিবাচক হয় এবং অন্য চ্যানেলটি নেতিবাচক হয় তবে পরীক্ষাটি পুনরাবৃত্তি করা উচিত। যদি এটি একই সময়ে ইতিবাচক হয়, তবে এটি SARS-Cov-2 পজিটিভ হিসাবে বিচার করা হবে, অন্যথায় এটি SARS-Cov-2 নেতিবাচক হিসাবে বিচার করা হবে।